La Leptospirosis humana continúa siendo una de las zoonosis de mayor repercusión económica y social  en los países tropicales y subtropicales, es una de las enfermedades infecciosa que aporta más casos a la letalidad y mortalidad, existiendo dificultades en el manejo de los casos. Por tales motivos se diseño un estudio de corte  transversal, con el objetivo de evaluar el nivel de conocimientos en enfermeros del Instituto de Medicina Tropical “Pedro Kourí” sobre el manejo de enfermería, diagnóstico microbiológico y epidemiológico de la leptospirosis humana e identificar principales dificultades que pudieran influir en la calidad de la atención  de enfermería y en la mortalidad por leptospirosis en el Instituto. Más del 80% de los profesionales fueron evaluados de no satisfactorios en la sección clínica, epidemiología y microbiología. El 84.8% y el 82.7% de los enfermeros refirieron que las principales dificultades radican en el desconocimiento en cuanto a complicaciones y exámenes complementarios que se indican en esta enfermedad. Los profesionales que no habían realizado maestrías y no estaba categorizados docentemente tuvieron mayor probabilidades de obtener evaluaciones no satisfactorias.